DNA -streckkodning

Från Wikipedia, den fria encyklopedin
Hoppa till navigation Hoppa till sökning

DNA-streckkodning ( Engelska DNA streckkodning) är en taxonomisk metod för arter identifiering baserad på DNA-sekvensen av en markörgen . [1] Basparens sekvens används på samma sätt som streckkoden på livsmedelsförpackningar som en identifierare för en viss art. Namnet Barcoding (Engl. Bar = "Bar") kommer från denna analogi. Eftersom DNA -sekvensen förändras i stort sett enhetlig takt på grund av punktmutationer (se molekylär klocka ) har närbesläktade individer (och arter) fler liknande sekvenser. Så länge en art förblir odelad, dvs har en gemensam genpool , balanseras skillnader mellan olika populationer ständigt ut genom genflöde . Med separationen under speciering utvecklas sekvenserna isär med en nästan konstant hastighet. Om prover från två individer har signifikant olika sekvenser är detta ett tecken på att de kommer från olika arter.

DNA-streckkodning handlar inte om DNA: s proteinkodande egenskap. Eftersom kodningssekvenser är föremål för val , är deras användning till och med förbehållen. Det är fortfarande möjligt eftersom den genetiska koden i den tredje positionen av bas tripletten är i stort sett överflödig ("degenererad kod"). Som ett resultat är sekvensen knappast utsatt för effekten av urvalet och kan användas som en neutral markör. För detektering av skillnader mellan närbesläktade arter kan en snabbt föränderlig bassekvens, t.ex. B. från ett funktionslöst DNA -segment, mest lämpligt. Långsamt föränderliga sektioner är bättre lämpade för större skillnader. Följaktligen har olika DNA -segment föreslagits för metoden.

Den mest utbredda är en sektion från mitokondriellt DNA (mtDNA). Detta har fördelen att det inte innehåller några introner (utom i svampar), endast utsätts för mycket liten rekombination och ärvs i haploidläget (det vill säga att det inte finns två olika kromosomer med möjligen olika alleler , som i kärngenomet); detta sparar kloning som annars skulle vara nödvändig. Av de 13 proteinkodande generna i mtDNA används en 648 baspar (förkortad: bp) region av genen i subenhet I av cytokrom c-oxidas (COI eller cox1) som standarden, [2] eftersom denna gen skiljer sig mer vida än det mellan olika arter andra mitokondriella gener.

avrättning

Processen är baserad på applicering av polymeraskedjereaktionen (förkortad till PCR). Följande arbetssteg krävs:

  • Extraktion av DNA från den undersökta organismen eller provet (se huvudartikel DNA -extraktion ). Färskt material eller museimaterial kan användas för detta, men konserveringen med formalin , som ofta praktiseras på museer, orsakar problem.
  • Genomförande av polymeraskedjereaktionen . För att reaktionen ska starta krävs ett kort DNA -segment, primern, utöver enzymet. Det verkar faktiskt som att välja primern borde vara en omöjlig uppgift; det beror ju på basens sekvens av DNA: t, vilket är okänt och som metoden för närvarande försöker ta reda på. Lyckligtvis finns det många sektioner varvat i genomet som är väldigt lite varierande mellan olika organismer. Dessa bevarade sekvenser kodar vanligtvis för en biologiskt grundläggande uppgift, så att mutationer vid denna tidpunkt vanligtvis är dödliga. Standardsekvensen för cox1 -genen valdes inte minst eftersom det fanns bra primers för den. Valet av primer är dock ett svårt steg och olika primers kan ge olika sekvenser. Det är möjligt att generera nya primers med enzymet revers transkriptas , men detta är alldeles för tidskrävande för rutinmässiga undersökningar. Enzymet som används för replikationen är Taq -polymeras från Thermus aquaticus -bakterien, som har varit tillgängligt för rutinmässig användning sedan 1987 - en väsentlig förutsättning för metodiken.
  • Sekvensering av det replikerade (eller "amplifierade") DNA (se huvudartikel DNA -sekvensering ). Detta var förr en svår laboratorieuppgift. Idag finns det kraftfulla automatiska sekvenseringsmaskiner med höga genomströmningshastigheter tillgängliga som utför sekvensen automatiskt. Därför lägger sekvensering i dag varken till svårigheterna eller kostnaderna för metoden, och det lägger inte till något värt att nämna.
  • Analys av sekvensen. Om det redan finns en databas för den undersökta gruppen jämförs sekvensen med sekvenserna som lagras där. Om det är identiskt eller bara visar små variationer tillhör det undersökta urvalet förmodligen denna typ.Det är svårare om det inte finns någon databas alls eller om en är på väg att skapas med proverna, eller om provet inte matchar lagrade sekvenser. Okända prover grupperas av datorn efter sorteringsalgoritmer efter likhet, så att träd erhålls som liknar ett släktträd. Prover från samma art eller från mycket närbesläktade arter bör ha liknande sekvenser och därför ligga nära varandra när de sorteras. Om proverna av en "art" visar två eller flera tydligt separerade grupper (eller "kluster") är detta en stark indikation på att det faktiskt finns flera arter som hittills inte har identifierats och differentierats. Tyvärr varierar skillnaderna mellan olika arter i olika systematiska grupper mycket, och samtidigt kan polymorfismen inom en art ibland vara ganska stor. Det är därför inte möjligt att ange en universell tröskel från vilken divergerande sekvenser kan vara säkra att representera olika arter. I storleksordningen har en skillnad på 3% visat sig i många fall, men både lägre och högre värden används ofta. Vad kluster av dataanalys, ibland kallade operativa taxonomiska enheter (OTU: er), verkligen representerar och om man enkelt kan jämställa dem med arter är en av huvudstridpunkterna i processen.

Ansökningar

Det finns ett antal initiativ runt om i världen som försöker bygga databaser med DNA -streckkodsekvenser som referenser för specifika grupper av arter. Huvudsyftet med initiativen är att samla in och läsa i sekvenser av tydligt identifierade individer av den beskrivna arten för att göra data tillgänglig för användarna. IBOL -initiativet (International Barcode of Life Project) samordnar insatser i många artgrupper och ger tekniskt bistånd. Några av de initiativ som deltar är: The Fish Barcode of Life Initiative (FISH-BOL) försöker bygga en databas med DNA-streckkoder för alla fiskarter världen över. [3] ABBI är motsvarande initiativ för fåglarna. [4] Andra IBOL -initiativ försöker samma sak för fjärilar [5] och däggdjur [6] .

Ambitionen hos vissa forskargrupper går dock långt bortom dessa mål. Många drömmer om att en dag helt enkelt sekvensera osorterade prover från miljön och sedan mer eller mindre få en artlista över motsvarande livsmiljö utan att behöva anställa högutbildade, dyra och sällsynta specialister. [7] I en nära framtid förväntar sig andra att miniatyriseringen av komponenterna till och med är bärbara streckkodare, som kan användas på fältet eller på arbetsplatsen, pålitligt och i realtid, för att bestämma ett artnamn från de minsta proverna.

Fallstudier

  • En undersökning av den neotropiska fjärilen Astraptes fulgerator med DNA -streckkodning har visat att det som man tidigare trodde var en (polymorf) art faktiskt är ett komplex bestående av tio mycket likartade tvillingarter, som är morfologiskt knappt urskiljbara. [Åttonde]
  • I en studie om tropiska parasitoida bräcka getingar kunde 171 provisoriska (cirka 95% obeskrivna) arter urskiljas med hjälp av morfologiska metoder. DNA-streckkodning avslöjade förekomsten av ytterligare 142 arter som inte kunde identifieras i den morfologiska sorteringen, de flesta av dem värdspecifika. Studien tillåter extrapoleringar för det extrema överflödet av arter i denna grupp i tropikerna, där endast extremt få taxonomer världen över specialiserar sig. [9]
  • Metodens lämplighet för identifiering av arter av marina rödalger kan bevisas. Dessa är extremt svåra att skilja enligt morfologiska kriterier. [10]
  • I markväxter är cox1 -genen olämplig för DNA -streckkodning och ger inga användbara resultat. Ett antal andra gener testades för metoden. Hittills har den mest lämpliga delen av plastidgenen matK [11] (plastider, som mitokondrier, har sitt eget genetiska material). I en pilotstudie på orkidéarter påvisades att denna gen är lämplig för DNA -streckkodning av markväxter. När de används kan markörer för tropiska orkidéarter vara en viktig komponent för att förhindra smuggling. [12] En annan arbetsgrupp fann emellertid i träd av den ekonomiskt viktiga familjen Meliaceae ( mahognifamiljen ) att alla markörer på mitokondrier och plastider var lika opålitliga. De föreslår att en region i kärngenomet ska undersökas som en markör. [13]
  • Tillämpningen av metoden på primater av arter visade sig vara svår på grund av vissa metodiska problem, men det var möjligt och lovande för framtiden efter lämplig anpassning av standardmetoden. Även här kan metoden hjälpa till att begränsa smuggling (inklusive kött och andra produkter) och skulle vara till hjälp vid biomedicinsk forskning. [14]
  • En studie har visat att det är möjligt att bestämma art och kön för sibiriska tigrar och Amur -leoparder från avföringsprover som samlats in i livsmiljön. Detta innebär att den återstående fördelningen, ekologin och livsstilen för dessa extremt hemliga arter kan klargöras mycket lättare än med de mycket sällsynta visuella observationerna. [15]
  • Forskare i södra Frankrike har lyckats använda DNA från vattenprover för att ta reda på om individer av den amerikanska tjurfrogen finns i vattnet. Arten som introducerades för Europa befaras här på grund av dess effekter på den inhemska amfibiefaunan. Direkt upptäckt är svårt när befolkningstätheten är låg och är endast möjlig vid vissa tider på året. [16]

Stora fördelar med metoden

Förespråkarna för metoden nämner följande stora fördelar med DNA -streckkodning jämfört med mer traditionella taxonomiska arbetsmetoder, som de också delvis kan styrka (se fallstudierna):

  • Metoden gör det möjligt för icke-specialister att identifiera arter från svåra och artrika grupper. Detta är viktigt eftersom varje specialist med viss säkerhet bara kan ha en överblick över några tusen arter, men det finns miljontals arter (se: biologisk mångfald ). Antalet taxonomer är litet över hela världen. Det fortsätter för närvarande att minska avsevärt eftersom ämnet anses vara gammaldags och vid tilldelning av medel inom forskningsinstitutioner (t.ex. vid universitet) övervägs främst andra biologiska ämnen. Till exempel kommer stolar för klassisk taxonomi inte att fyllas igen eller forskningsfältet kommer att ändras vid ett nytt utnämning. Samtidigt bör livets biologiska mångfald beskrivas och registreras, vilket skulle ta århundraden med konventionella metoder vid nuvarande hastighet.
  • DNA -streckkodning gör det möjligt att tilldela delar och produkter från organismer till en art. Detta är avgörande för att lösa skyddad artsmuggling, efterlevnad av fångstkvoter och liknande frågor som överväldigar myndigheterna idag. Dessutom kan larver och andra utvecklingsstadier tilldelas arten (beskrivs mestadels efter vuxna).
  • Genom att analysera uppenbarligen kända arter visar det sig ofta att det finns morfologiskt oskiljbara tvillingarter ( kryptospecies ), som tydligt kan skilja sig åt i livsstil och specialisering. I andra grupper med få funktioner, såsom nematoder , är en artidentifiering enligt morfologin nästan omöjlig ändå. Här kan DNA -streckkodning avveckla sambandet mycket bättre eller åtminstone ge viktiga ledtrådar.

Kritik och gränser för metoden

De imponerande möjligheter som DNA -streckkodningsmetoden erbjuder vid snabb och enkel identifiering av arter bör inte dölja synen på brister som har hittats i olika områden. En okritisk acceptans av resultaten kan leda till allvarliga felbedömningar. Dessa avser olika aspekter av processen och kan delvis åtgärdas genom tekniska justeringar och förfiningar, men också grundläggande brister som gör användningen av DNA -streckkodning svår eller omöjlig för vissa tillämpningsområden.

Först och främst resulterar användningen av en mitokondriell markörgen i att förhållandet uteslutande bestäms i moderns arv, eftersom spermierna inte bidrar med några mitokondrier till den nya organismen. Detta gör det omöjligt att undersöka några av effekterna av hybridiseringar eller introgression. Denna effekt är endast signifikant vid ofullständiga artklyvningar eller mycket närbesläktade arter.

En annan grundläggande svårighet är att det sällan sker en skarp brytning mellan intraspecifik och interspecifik variation (dvs. den inom en art och mellan olika arter). Mycket polymorfa arter och nära besläktade grupper av arter är suddiga och suddiga. I grund och botten är detta inte ett problem med metoden, utan helt enkelt en effekt av naturen i sig, som inte alltid passar perfekt in i våra mer eller mindre artificiella sorteringskriterier. Problem uppstår dock av detta i ansökan, t.ex. B. när artantal ska jämföras.

Det blir ännu mer problematiskt om endast operativa taxonomiska enheter avgränsade med DNA -streckkodning behandlas som arter. B. i en livsmiljö beror kritiskt på tröskelvärdena som används i analysen. Detta gör subtila manipulationer möjliga. Eftersom tröskelvärdena kan vara mycket olika mellan olika grupper av organismer är det också mycket riskabelt att behandla dåligt undersökta eller okända sekvenser utan mycket liknande referensposter i databasen som verkliga biologiska enheter. De nämnda svårigheterna bör minska och slutligen försvinna när grupperna som studeras blir mer kända och databaserna blir mer fullständiga. Förespråkarna för den nya metoden hade dock alltid annonserat det faktum att den kunde användas för att bestämma biologisk mångfald direkt med liten ansträngning, det vill säga just utan fördjupad kunskap om arten på oberoende sätt.

Vissa forskare påpekar att markörgenen cox1 är föremål för mer riktat urval, åtminstone i vissa grupper av organismer. På grund av markeringens effekt är förändringar inte längre nödvändigtvis neutrala, de kan gå långsammare eller snabbare än förväntat och därmed snedvrida resultaten. Urvalet kan riktas direkt till det kodade enzymet eller det kan härledas indirekt från kopplingen till andra gener (kopplingsobalans, ungefär: ”genlänkningsobalans”). Hos insekter och andra leddjur z. B. den nästan allmänt utbredda infektionen med symbiotiska eller skadliga bakteriestammar, z. B. av släktet Wolbachia , producera starka obalanser av mtDNA inom en art (varvid man då felaktigt antar att det finns flera, kryptiska arter) och gör individuella populationer av olika arter mer lika varandra än andra populationer inom arten (här missförstår man antingen artskillnaden helt eller så skiljer man för många arter). [17] Dessa effekter är inte utan betydelse för uppskattningarna av den biologiska mångfalden , eftersom ungefär hälften av de beskrivna arterna (och förmodligen en betydligt högre andel av de okända) är insekter. I en pilotstudie med en flugsort kunde det visas att effekten inte bara är teoretiskt trolig, utan faktiskt förfalskar resultaten. [18]

Ett annat problem med metoden är pseudogener hos mitokondriella gener i cellkärnan. [19] Som ett resultat av kopieringsfel är delar av mtDNA ibland felaktigt integrerade i kärngenomet, varför det antas att de flesta av de ursprungligen mycket fler oberoende organellgenerna var integrerade i cellkärnan tidigare. Även om denna integration är funktionellt slutförd, införlivas sådana gener fortfarande ibland i cellkärnan, där de förblir funktionslösa och vanligtvis degenererar mer eller mindre snabbt till pseudogener genom selektivt neutrala mutationer. [20] Hos många arter finns det många sådana pseudogener i cellkärnan; hos människor finns det till exempel mer än 500 för COI ensam. [21] Med hjälp av de vanliga primersna i DNA -streckkodning dupliceras pseudogenerna i PCR, precis som den "riktiga" genen. Eftersom detta är sekvenser som har muterats under en längre eller kortare tid oberoende av den ursprungliga genen, de skiljer sig från det och resulterar i felaktiga mätvärden. I värsta fall misstas sekvensen av pseudogenen för markörgenen, vilket innebär att arten i fråga är helt fel sorterad. Hur okända pseudogener kan förstöra en analys visas t.ex. B. Jennifer E. Buhay (2009). [22] I många fall är det möjligt att känna igen pseudogener: Eftersom de inte är föremål för selektion uppstår mutationer av en slump som helt skulle förstöra integriteten hos funktionella gener. Dessa är t.ex. B. Stoppa kodoner i mitten av genen eller skift i läsramen. [23] Bortsett från sådana entydiga fall är deras upptäckt omöjligt utan ytterligare information.

Det bör också påpekas att metoden naturligtvis endast kan ge korrekta resultat om sekvensen som lagras i referensdatabasen faktiskt tillhör den angivna typen. I en studie från 2006 befanns cirka 20 procent av artnamnen på svamp vara felaktiga. [24] Situationen i mikrokosmos är särskilt dödlig: det finns ingen DNA -information för de flesta artnamn, och många DNA -sekvenser kan inte tilldelas någon Linné -binomial . [25]

Turbotaxonomi

Under tiden försöker man använda DNA -streckkodningsprocessen inte bara för att identifiera arter som redan har beskrivits, utan också för att standardisera beskrivningen av nya arter ("turbotaxonomi"). [26] Streckkodssekvensen, tillsammans med en starkt förkortad morfologisk beskrivning, tjänar sedan till att definiera den nya arten, som endast ska beskrivas fullständigt vid behov enligt dagens standard (se första beskrivningen ). Faktum är att det för närvarande finns arter som skiljer sig från andra arter enbart på grundval av DNA -sekvensen.

Se även

svälla

  1. ^ Paul DN Hebert, Alina Cywinska, Shelley L. Ball, Jeremy R. de Waard (2003): Biologiska identifikationer genom DNA -streckkoder. Proceedings of the Royal Society London Series B 270, 313-321.
  2. ↑ Dirk Steinke & Nora Brede (2006): DNA -streckkodning. I: Biologi i vår tid. Vol. 36, nr 1, sid. 40-46. doi : 10.1002 / biuz.200410302 PDF ( Memento av originalet från 20 augusti 2008 i Internetarkivet ) Info: Arkivlänken infogades automatiskt och har ännu inte kontrollerats. Kontrollera original- och arkivlänken enligt instruktionerna och ta sedan bort detta meddelande. @ 1 @ 2 Mall: Webachiv / IABot / www.bolinfonet.org
  3. ↑ Arkiverad kopia ( Memento av originalet daterad 23 maj 2018 i Internetarkivet ) Info: Arkivlänken infogades automatiskt och har ännu inte kontrollerats. Kontrollera original- och arkivlänken enligt instruktionerna och ta sedan bort detta meddelande. @ 1 @ 2 Mall: Webachiv / IABot / www.fishbol.org
  4. ↑ http://www.barcodingbirds.org/
  5. ↑ http://www.lepbarcoding.org/
  6. ↑ http://www.mammaliabol.org/
  7. ↑ Alice Valentini, Francois Pompanon, Pierre Taberlet (2009): DNA -streckkodning för ekologer. Trends in Ecology & Evolution 24 (2): 110-117.
  8. ^ Paul DN Hebert, Erin H. Penton, John M. Burns, Daniel H. Janzen, Winnie Hallwachs (2004): Tio arter i ett: DNA -streckkodning avslöjar kryptiska arter i den neotropiska skepparfjärilen Astraptes fulgerator. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 101 (41): 14812-14817.
  9. ^ M. Alex Smith, Josephine J. Rodriguez, James B. Whitfield, Andrew R. Deans, Daniel H. Janzen, Winnie Hallwachs, Paul DN Hebert (2008): Extrem mångfald av tropiska parasitoida getingar som avslöjats av iterativ integration av naturhistoria, DNA -streckkodning, morfologi och samlingar. Proceedings of the National Academy of Science USA 105 (34): 12359-12364.
  10. ↑ Lavinia Robba, Stephen J. Russell, Gary, L. Barker, Juliet Brodie (2006): Bedömning av användningen av mitokondriell cox1-markör för användning vid DNA-streckkodning av röda alger (Rhodophyta). American Journal of Botany 93 (8): 1101-1108.
  11. ^ Khidir W. Hilu & Hongping Liang (1997): MatK-Ggene: sekvensvariation och tillämpning inom växtsystematik. American Journal of Botany 84 (6): 830-839.
  12. ^ Renaud Lahaye, Michelle van der Bank, Diego Bogarin, Jorge Warner, Franco Pupulin, Guillaume Gigot, Olivier Maurin, Sylvie Duthoit, Timothy G. Barraclough, Vincent Savolainen (2008): DNA -streckkodning av floror av hotspots för biologisk mångfald. Proceedings of the National Academy of Science USA 105 (8): 2923-2928.
  13. ↑ AN Muellner, H. Schaefer, R. Lahaye (2011): Utvärdering av kandidat -DNA -streckkodningsplatser för ekonomiskt viktiga timmerarter av mahognifamiljen (Meliaceae). Molekylära ekologiresurser 11 (3): 450-460. doi : 10.1111 / j.1755-0998.2011.02984.x .
  14. ^ Joseph G. Lorenz, Whitney E. Jackson, Jeanne C. Beck, Robert Hanner (2005): Problemen och löftet med DNA -streckkoder för artdiagnos av primatbiomaterial. Philosophical Transactions of the Royal Society Series B 360: 1869-1877.
  15. ↑ Taro Sugimoto, Junco Nagata, Vladimir V. Aramilev, Alexander Belozor, Seigo Higashi, Dale R. McCullough (2006): Art och könsidentifiering från avföringsprover av sympatriska köttätare, Amur leopard och sibirisk tiger, i ryska Fjärran Östern. Conservation Genetics 7: 799-802.
  16. ↑ Gentile Francesco Ficetola, Claude Miaud, François Pompanon, Pierre Taberlet (2008): Artdetektering med miljö -DNA från vattenprover. Biology Letters 23 (4): 423-425.
  17. ↑ Hurst, GD & Jiggins, FM (2005): Problem med mitokondriellt DNA som markör i befolkningen, fylogeografiska och fylogenetiska studier: effekterna av ärftliga symbionter. I: Proceedings of the Royal Society London Series B 272: 1525-1534. PDF @ 1 @ 2 -mall: Toter Link / www.gen.cam.ac.uk ( sidan är inte längre tillgänglig , sök i webbarkiv ) Info: Länken markerades automatiskt som defekt. Kontrollera länken enligt instruktionerna och ta sedan bort detta meddelande.
  18. ↑ TL Whitworth, RD Dawson, H. Magalon, E. Baudry (2007): DNA -streckkodning kan inte på ett tillförlitligt sätt identifiera arter av blåslända släktet Protocalliphora (Diptera: Calliphoridae). I: Proceedings of the Royal Society London Series B 274: 1731-1739. doi : 10.1098 / rspb.2007.0062 .
  19. ↑ Hojun Song, Jennifer E. Buhay, Michael F. Whiting, Keith A. Crandall (2008): Många arter i ett: DNA -streckkodning överskattar antalet arter när kärnkrafts mitokondriella pseudogener samförstärks. Proceedings of the National Academy of Science USA 105 (36): 13486-13491. doi : 10.1073 / pnas.0803076105
  20. ↑ D. Bensasson, DX Zhang, DL Hartl, GM Hewitt (2001): Mitokondriella pseudogener: Evolutionens felplacerade vittnen. Trender inom ekologi och evolution 16: 314-321.
  21. ^ Erik Richly & Dario Leister (2004): NUMTs i sekvenserade eukaryota genomer. Molekylärbiologi och evolution 21 (6): 1081-1084. doi : 10.1093 / molbev / msh110 .
  22. ↑ Jennifer E. Buhay (2009): "COI-liknande" sekvenser blir problematiska i molekylära systematiska och DNA-streckkodningsstudier. Journal of Crustacean Biology 29 (1): 96-110. doi : 10.1651 / 08-3020.1
  23. ↑ Ett exempel: Antonis Rokas, George Melika, Yoshihisa Abe, Jose-Luis Nieves-Aldrey, James M. Cook, Graham N. Stone (2003): Livscykelstängning, härstamningssortering och hybridisering avslöjades i en fylogenetisk analys av europeiska ekgallvaskar (Hymenoptera: Cynipidae: Cynipini) med hjälp av mitokondriella sekvensdata. Molecular Phylogenetics and Evolution 26: 36-45.
  24. ^ Nilsson RH, Ryberg M, Kristiansson E, Abarenkov K, Larsson KH, Kõljalg U (2006): Taxonomic Reliability of DNA Sequences in Public Sequence Databases: A Fungal Perspective. PLoS ONE 1 (1): e59. doi : 10.1371 / journal.pone.0000059
  25. ^ Gottschling M, J Chacón, A Žerdoner Čalasan, St Neuhaus, J Kretschmann, H Stibor & U John (2020): Fylogenetisk placering av miljösekvenser med hjälp av taxonomiskt tillförlitliga databaser hjälper till att noggrant bedöma dinofytens biologiska mångfald i bayerska sjöar (Tyskland). Freshw Biol 65: 193-208. doi : 10.1111 / fwb.13413
  26. ^ Alexander Riedel, Katayo Sagata, Yayuk R Suhardjono, Rene Tänzler, Michael Balke (2013): Integrativ taxonomi på snabbspåret - mot mer hållbarhet inom biologisk mångfaldsforskning. Frontiers in Zoology 10:15 ladda ner

webb-länkar

Hämtad från " https://de.wikipedia.org/w/index.php?title=DNA-Barcoding&oldid=213020944 "